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49%的抗体竟然未通过,我要怎么办?——挑选好抗体系列报道之一

 

  HumanProteinAtlas数据库,简称HPA数据库,它致力于提供全部24,000种人类蛋白质的组织和细胞分布信息,并免费提供公众查询。来自瑞典皇家理工学院的科学家Berglundetal.(2008)当初在参与这个项目时,需要使用抗体去检测正常和疾病组织中蛋白在细胞中的定位,于是他们自己生产了大量的抗体。可他在检测抗体的成功率时发现,9000个抗体中有49%在验证时未能通过。

 

  Berglund的研究中也强调了商业化售卖的抗体也存在类似的失败率,51家供应商的抗体失败率从0%-100%。Berglund及其它作者发现的商品化抗体的高失败率令人担忧,这意味着大量的时间和研究经费被浪费。每年因抗体表现差而浪费的钱约8亿美金,其中3.5亿美金浪费在生物医学领域,因为极可能是抗体因素导致的发表结果不能被重复(BradburyandPlückthun2015)。

 

例如,多个实验室的研究表明在肿瘤细胞中红细胞生成素激活了红细胞生成素受体(EpoR),但是后来有研究指出这些文章中使用的4个EpoR抗体仅仅有一个可以检测EpoR而且都不适合免疫组化实验(Elliottetal.2006)。还有,Prassas和Diamandis(2014)花了2年时间和50万美金研究胰腺癌的潜在标志物CUZD1,使用的ELISA试剂盒居然是识别CA125的,OhMyGod!                                                           

 

  抗体本身不好做,因为依赖不可预测的动物免疫反应,而且缺乏强制的抗体验证标准。供应商们频繁秀出裁剪的结果图,验证结果中缺乏合适的对照,或检测大量纯化的蛋白或刺激后细胞系过表达的蛋白而非生理相关样品中的内源蛋白。这些做法是不能准确评估一个抗体的性能的。

 

  那么,我们要如何擦亮眼睛去选一个好抗体呢?

 

 

你可以依照以下指南快速挑到高品质的抗体。