解锁磷酸化蛋白研究：瑞孚迪均相免洗技术，让细胞信号清晰可“见”！

在蛋白质的生物合成过程中，蛋白翻译后修饰(PTM)通过在特定氨基酸残基上添加修饰基团，调控蛋白质的理化特性，进而影响其空间结构、活性、细胞内定位以及与其他蛋白质的相互作用。PTM赋予单个蛋白质多种功能，使其能够响应不同的生理需求，构成了细胞信号传递的重要机制，因此也被称为细胞的“自然语言”。蛋白翻译后修饰包括：磷酸化、糖基化、甲基化、羟基化、脂酰化、羧基化等共价修饰。

蛋白质磷酸化作为一种常见的PTM方式，在细胞内具有重要地位，约30%以上的蛋白质都存在磷酸化现象。鉴定磷酸化蛋白及其修饰位点对于深入研究相关信号通路的机制具有极其重要的意义。今天我们就来聊聊，如何用前沿技术解锁磷酸化蛋白的研究密码～

一、磷酸化蛋白：细胞信号的“开关大师”

蛋白质的生物合成并非终点，翻译后修饰才是赋予其“灵魂”的关键！

由蛋白激酶催化，将ATP/GTP的磷酸基团“安装”到蛋白的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)或酪氨酸(Tyr)残基上，约30%以上的蛋白质都有这种修饰。

图1 蛋白磷酸化图解

✅激活蛋白质功能（如酶活性）

✅调控细胞增殖、迁移、分化等关键过程

✅反映信号通路的激活状态（堪称通路的“信号灯”）

可以说，如果把细胞比作一台精密仪器，那么，磷酸化蛋白就是仪器里的 “调节旋钮”，轻轻一转，就能触发一系列复杂的生物反应。

二、检测难题：如何精准捕捉“动态信号”

研究磷酸化蛋白的核心挑战在于：

• 动态性：磷酸化状态转瞬即逝，需快速捕获

• 低丰度：修饰位点可能仅占总蛋白的百分之几

• 复杂性：不同细胞模型（贴壁/悬浮、原代/细胞系）需定制化方案

别担心！瑞孚迪免洗检测技术 HTRF® 和 AlphaLISA® 为我们提供了高效解决方案！

三、免洗检测黑科技：HTRF® vs. AlphaLISA®

• 操作简便：无需洗涤步骤，3-4 步完成检测，省时又省力；

• 高通量：兼容 96、384 、1536孔板，适合大规模筛选；

• 样本友好：仅需微量样本（珍贵原代细胞 / 肿瘤组织也能轻松检测），节省样品；

• 多重分析：可同时检测磷酸化蛋白与总蛋白，直接计算修饰比例；

• 更好的实验性能：线性更宽、灵敏度更高；

• 应用广泛：样品兼容性高。

图2 HTRF技术原理图解

图3 AlphaLISA技术原理图解

图4 HTRF技术与AlphaLISA技术全流程操作对比

四、磷酸化热门研究领域应用

• 检测靶点：ERK、AKT、ZAP70、SLP76、NF-κB等

• 应用场景：免疫治疗药物筛选、T细胞活化机制研究

• 检测靶点：JAK-STAT、BTK、IFN、TNF、IL-6等细胞因子

• 应用场景：炎症机制研究、自身抗体药物开发

数据亮点：通过HTRF®/AlphaLISA®可直接获取化合物IC50值和作用动力学曲线，助力机制与药效双重解析！

五、为什么选择HTRF®和AlphaLISA®技术

✅稀有样本救星：仅需纳克级蛋白，珍贵临床样本也能充分利用；

✅实验效率UP：无需繁琐洗涤，新手也能快速上手；

✅结果更可靠：均一化检测体系，减少人为操作误差。

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